Digestia de restricție se realizează prin incubarea moleculei de ADN țintă cu enzime de restricție- enzime care recunosc și leagă secvențe specifice de ADN și scindează la nucleotide specifice fie în secvența de recunoaștere, fie în afara a secvenței de recunoaștere.
Cum se digeră enzimele de restricție?
Protocol de digestie a enzimelor de restricție
- Adăugați componente într-un tub curat, în ordinea afișată: …
- Incubați reacția la temperatura de digestie (de obicei 37 °C) timp de 1 oră.
- Opriți digestia prin inactivare la căldură (65 °C timp de 15 minute) sau adăugare de 10 mM concentrație finală EDTA.
Enzima de restricție digeră ADN-ul?
Enzimele de restricție pot fi, de asemenea, utilizate pentru a genera capete compatibile pe produsele PCR. … În toate cazurile, una sau mai multe enzime de restricție sunt folosite pentru a digera ADN-ul rezultatfie în inserție nedirecțională, fie direcțională în plasmida compatibilă.
Cum funcționează enzimele de restricție ADN?
Cum funcționează enzimele de restricție? La fel ca toate enzimele, o enzimă de restricție funcționează prin potrivirea forme-la-formă Când intră în contact cu o secvență de ADN cu o formă care se potrivește cu o parte a enzimei, numită locul de recunoaștere, se înfășoară în jurul ADN-ului și provoacă o ruptură în ambele catene ale moleculei de ADN.
Ce enzimă digeră ADN-ul?
Aceste enzime se numesc endonucleaze de restricție sau enzime de restricție și sunt capabile să scindeze moleculele de ADN în pozițiile în care sunt prezente anumite secvențe scurte de baze.
