Pentru a putea extrage pigmenții din Cloroplastele sunt suspendate într-un tampon de izolare. Pentru a putea extrage pigmenții din cloroplaste, trebuie să scăpăm mai întâi de tampon. Care este cel mai bun mod de a separa cloroplastele de tampon? folosiți o centrifugă pentru a separa
Cum izolezi un cloroplast?
În metoda de izolare a cloroplastului, peretele celular este spart mecanic folosind un blender sau omogenizator. Apoi țesutul de frunze neîntrerupt și resturile celulare sunt îndepărtate prin filtrare. Cloroplastele sunt colectate prin centrifugare folosind un gradient percoll.
Cum se face un tampon de izolare a cloroplastului?
Pregătiți cantitatea necesară de tampon de izolare cloroplast 1X prin diluând stocul tampon de 2X 1:1 cu apă dH2O Adăugați 10 µL de soluție BSA 10% per ml de 1X cloroplast Tampon de izolare. Chiar înainte de utilizare, adăugați 1 µL de DTT per 1 mL de tampon de izolare a cloroplastului. Etichetați acest buffer drept „Buffer complet”.
Ce este într-un tampon de izolare a cloroplastului?
Tampon de izolare ADN a constat din 100 mM NaCI, 100 mM Tris-HCI (pH 8,0), 50 mM EDTA și 1 mM DTT Liza de cloroplast a fost obținută prin incubarea pelet de cloroplast cu 8 ml tampon de izolare ADN, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-mercaptoetanol și 30 µl proteinază K (10 mg/ml) într-un tub de centrifugă la 55°C timp de 4 ore.
Care este pH-ul tamponului utilizat pentru omogenizarea frunzei de spanac în protocolul de izolare a cloroplastului?
Spanacul este încărcat cu cloroplaste bune și se izolează ușor. Va trebui să puneți frunzele într-un blender rece cu tampon fosfat de 0,1 M, pH 7,5 și zaharoză 0,5 M pentru a nu se sparge.
