Păstrați-le la rece! Procesul de a face celule competente este dificil din cauza nevoii ca celulele să rămână reci. Acest lucru este crucial deoarece celulele sunt atât de sensibile și fragile în timp ce devin competente Menținerea temperaturii scăzute ajută la evitarea morții celulelor în timpul procesării.
De ce reacțiile sunt menținute pe gheață în timpul experimentului de transformare?
Amestecul plasmid-celulă este apoi încălzit pentru scurt timp la 45–50°C, permițând ADN-ului să intre în celulă prin membrana ruptă. Amestecul încălzit este apoi plasat din nou pe gheață pentru a reține plasmidele în interiorul bacteriei … Dacă soluția de ADN plasmidic conține prea multă sare, poate apărea arc, compromițând transformarea.
De ce puneți tuburile pe gheață?
De ce crezi că punem tuburile pe gheață? Pentru a introduce ADN-ul în bacterii, trebuie să facem găuri în ele cu clorură de calciu chimică (CaCl2). … Găurile făcute pentru a permite ADN-ului să intre lasă bacteriile cu scurgeri. Dacă nu îi ținem pe gheață, vor „sângera” până la moarte.
Care este rolul clorurii de calciu rece ca gheața în prepararea celulelor competente?
Procesul de transformare prin șoc termic al clorurii de calciu încurajează celulele bacteriene să preia ADN-ul din mediul înconjurător. … Soluția de CaCl2 rece ca gheața facilitează legarea ADN-ului de suprafața celulei, care apoi intră în celulă după o scurtă perioadă de șoc termic (3).
Cum stocați celulele competente?
Celulele competente trebuie stocate la - 80°C. Depozitarea la -20°C va duce la o scădere semnificativă a eficienței transformării (TE). Când au fost testate pe NEB 5-alfa Competent E. coli (NEB C2987H), celulele au pierdut 94,5% din TE după doar 24 de ore de depozitare la -20°C.
