Următorul este o prezentare generală a diferiților pași ai unui protocol de colorare indirectă cu imunofluorescență
- Planificarea experimentului și pregătirea mostrelor. …
- Sample Fixation. …
- Permeabilizare celulară. …
- Blocare. …
- Incubarea cu anticorpi primari. …
- Incubare secundară cu anticorpi. …
- Contrasă și montaj.
Cum se efectuează imunofluorescența?
Toți pașii de incubare au loc la temperatura camerei
- Spălați celulele de două ori și folosiți o pensetă pentru a plasa cu grijă lama cu celulele răsturnate în camera umidificată.
- Reparați cu 4 % formaldehidă timp de 10 minute și spălați 3 ×.
- Permeabilizați cu 0,1 % TX-100/PBS timp de 15–20 de minute și spălați 3 ×.
Cum folosiți imunofluorescența într-o celulă?
Protocol de imunofluorescență pentru celulele aderente
- Sămânță 1–1,5 x104 celule per godeu dintr-o lamă cu 4 camere în 500 ml de mediu de cultură. Incubați la 37°C la 5% CO2.
- 32–36 de ore după însămânțarea celulelor, îndepărtați mediul de cultură celulară și clătiți celulele de 3 ori folosind 500 µL de 1X PBS.
Care este un exemplu de imunofluorescență?
De exemplu, un cercetător ar putea crea anticorpi primari la o capră care recunosc mai multe antigene și apoi să folosească anticorpi secundari de iepure cuplați cu colorant care recunosc regiunea constantă a anticorpilor de capră ( anticorpi anti-capră de iepure).
La ce folosește colorarea prin imunofluorescență?
Cotația cu imunofluorescență (IF) este o tehnică folosită în cercetarea biologică și diagnosticarea clinică IF utilizează anticorpi marcați cu fluorescent pentru a detecta antigene țintă specifice. Urmat de imagini, este o tehnică foarte directă, deoarece puteți vedea ceva.
